2591-17-5

Cas 2591-17-5  D-荧光素

荧光素（Luciferin）是常见生物性发光报告基因荧光素酶（Luciferase）在体内成像的底物。

作用原理是荧光素酶在Mg2+和O2参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中，

发出生物荧光(bioluminomescence),然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。

目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。

这三种产品主要的差别在于溶解特性上:

D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。

溶于甲醇（10mg/ml）和DMSO（50mg/ml）。

外观:淡黄色固体

熔点:200-204℃

储存:-20℃低温避光保存

应用：

1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；

2）广泛用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析；

使用方法：

1 体外生物发光检测

1）1g的D-Luciferin Firefly, free acid溶解入33.3ml的无菌水中，配制成30mg/ml的储存液（200×）。混匀后用0.2µm滤膜过滤，然后立即使用或分装于-80℃避光保存，避免反复冻融，冻存的储存液可保存1年。注：D-Luciferin Firefly, free acid储存液也可用弱碱（如 NaOH，KOH溶液）或DMSO溶解，用碱性pH溶液去溶解本品，如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液来中和，调整至所需的pH环境。

2）用完全培养基将储存液按 1:200稀释（储存液：完全培养基1:200），配制成工作液（终浓度150µg/ml）。

3） 成像前，去除培Luciferase表达细胞中的培养基，加入1×荧光素工作液37℃孵育5min, 然后进行图像分析。

4）工作液应在使用后丢弃。

2 体内活体成像检测

1）1g的D-Luciferin Firefly, free acid用66.6ml的DPBS(, w/o Mg2+ 和Ca2+)配制 D-荧光素工作液（15mg/ml），0.2µm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-80℃避光保存，避免反复冻融。一旦使用，放到 4℃解冻，保持冰冷且避光，冻存的储存液可保存1年。注：D-Luciferin Firefly, free acid储存液也可用弱碱或DMSO（w/o Mg2+）配置。

2） 每只老鼠的注射量取决于老鼠的体重：150mg/Kg。

3） 注射入体内 10-15min后，进行成像分析。注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。