鲁米诺(luminol) 、异鲁米诺(isoluminol) 及其衍生物是最早在CLIA 中使用的一种常用的化学发光物质 这类物质的发光为氧化反应发光, 它们在碱性条件下通过辣根过氧化物酶(HRP) 催化, 被H2O2 氧化生成3 - 氨基邻苯二酸的激发态中间体,当其回到基态时发出光子, 以鲁米诺为例其发光机理
鲁米诺的发光光子产率约为0. 01 , 最大发射光波长为425nm。早期用鲁米诺直接标记抗原或抗体, 但由于标记后发光强度降低而使其灵敏度受到影响, 近年来改用HRP 标记抗原或抗体, 免疫反应后, 利用鲁米诺作发光底物, 在发光启动试剂(NaOH + H2O2) 作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于免疫反应中酶的浓度。如果不使用增强剂, 鲁米诺体系的发光基本上为闪光型且信号弱。1983 - 1984 年Whitechead 和Thorpe 等首先在上述体系中加入合成的荧光素即一种6 - 羟基苯并噻唑的衍生物, 可以使发光时间延长持续至7min ,光信号强度提高7 倍, 并降低本底信号强度, 将信噪比提高达原来的80 倍, 此即为Luminol/ H2O2/HRP/ Enhance System。1985 年发现一些取代酚如对位碘苯酚、1 - 溴- 2 - 萘酚、对位苯基苯酚、对羟基肉桂酸和4 - 苯基硼酸等是更好的增强剂,发光的持续时间可延到30 - 60min ,发光强度至少增加100 倍以上。目前鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物应用于CLIA ,通常采用的体系是Luminol/ H2O2/ HRP/Enhance System , 即用HRP 标记抗原或抗体, 以鲁米诺或异鲁米诺及其衍生物作发光底物, 对碘苯酚或对苯基酚等作增强剂,用NaOH + H2O2 作发光启动试剂,化学发光反应2min 后, 光发射强度达到最高峰; 20min 后, 光强度减少20 %。Amersham公司的Amerlite 化学发光免疫分析系列商品试剂盒采用Luminol/ H2O2/ HRP/ p - iodphenol System。
