199293-83-9

Cas 199293-83-9 吖啶酯（NSP-SA-NHS）和相关化合物已被证明是非常有优势的化学发光标记物，稳定性，活性和敏感性超过了那些放射性同位素。吖啶酯能与任何含有氨基的蛋白发生反应（见图1）。在碱性条件下，NHS将会离去，吖啶酯将会以一个稳定的酰胺键与蛋白质结合形成吖啶化合物。反应完成后，多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。在存在碱性过氧化氢，吖啶标记的蛋白不需要酶催化可自行发光。加入激发试剂后，体系立即释放光子，可以用430nm标准光度计检测。这个发光过程是十分短暂（整个过程的发生小于2秒），触发方案必须增加内部光度计和光子探测器。蛋白质，多肽，抗体，核酸都可以用吖啶标记。标记化合物在碱性过氧化氢的激发下快速发光，通过收集光子可以检测到标记化合物。

主要用途： 化学发光及免疫分析、受体分析、核酸及多肽检测等研究。

发光原理

在碱性H2O2溶液中,吖啶酯受到过氧化氢离子的进攻,生成一个有张力的不稳定的二氧乙烷,进一步分解成CO2和电子激发态的吖啶酮,当吖啶酮回到基态时发出最大吸收波长430nm的光子.

产物特点

1 发光反应在形成电子激发态中间体之前,联结于吖啶环上的不发光的取代部分与发光部分分离,因而其发光效率基本不受取代基结构的影响.

2 不需催化剂,也不需要增强剂,在有H2O2的稀碱性溶液中即可发光.

3 其发光类型为闪光型,加入激发液后,0.4s左右发光强度达最大,半衰期0.9s左右.

产品优点

1 背景发光低,信噪比高

2 发光反应,干扰因素少

3 光子释放快速集中,发光效率高,发光强度大

4 易与蛋白偶联,偶联后光子产率不减少,增加灵敏度,2-8℃可以保存数月之久

5 固相分离剂为极细的磁粉,除增大包被面积,加快反应外,亦可同时清洗.

产品稳定性

1 在酸性溶液中(pH<4.8)都很稳定,与蛋白质偶联物在室温下保存4周,其光量子产率不降低,冻干品在-20℃下,可以保存一年以上.

2 当pH>4.8,尤其在碱性溶液中,吖啶化合物由于部分发生水解降低了其稳定性,水解过程为不发光的暗反应过程;水解程度随pH增大而增大,随温度的升高而增大.

3 吖啶酰胺稳定性较高于吖啶酯结构,抗水解能力较强.

4 吖啶环或酚环或苯磺酰环上连有甲基等给电基团,由于空间位阻大,热稳定性增加;连有吸电子基团,有利于亲核取代反应而使其稳定性下降.

5 部分用户反馈蛋白标记后,过段时间发光量有所下降,建议:

偶联后保存用的缓冲液尽量用弱酸性的缓冲液,鼓氮气除去其中的氧气.密封避光低温保存.有条件的可以制成冻干样再保存

图1.吖啶脂标记化学及其化学发光。 

产品答疑

1 吖啶酯在DMF中的溶解度最大值多少?

答:吖啶酯用DMF最高溶解的浓度:4mM

2 避光的要求严格吗？有没有具体的研究数据，比如多长时间光照，信号衰减多少之类的？

答: 发光标记物在光照条件下有可能部分分解,以致影响发光效果.吖啶酯的实验操作和储存建议避光条件下处理,目前暂时没有具体的研究数据.

    吖啶酯在碱性和氧化环境下均不稳定,易分解.

3 吖啶酯除了DMF还可以用什么溶剂来溶解?

答:除了DMF,也可以用无水DMSO等非质子性溶剂来溶解.

4 吖啶酯的溶剂有什么要求?

答:标记前:由于吖啶酯末端羧基经NHS活化,较为活泼,请用非质子性的干燥无水溶剂来溶解;

   标记后:标记后吖啶酯与被标记物之间以酰胺键或者酯键等形式存在,质子性溶剂基本没有太大影响;吖啶酯本身活性位点在碱性和氧化环境下不稳定,此时应根据被标记物的稳定性配制相应的非强碱性非氧化的体系中处理.

5 吖啶酯标记后如何分离纯化?

答: 吖啶酯标记蛋白等大分子化合物建议用G25脱盐柱分离;

    吖啶酯标记小分子化合物建议用柱层析分离;

6 吖啶酯标记参考实验?

答: 吖啶酯标记试剂盒的说明书对吖啶酯标记蛋白的实验的提供了较为详尽的参考,可以参考以下附件:

吖啶酯化学发光免疫分析方法用于HIV-1p24抗原检测的研究

http://www.docin.com/p-90856609.html

Heliosense 吖啶酯蛋白标记试剂盒说明书-复件.pdf

7 吖啶酯标记效率如何计算?

答: 吖啶酯标记效率可以参考以下计算方法进行计算评估

8 吖啶酯标记化学发光检测仪器推荐

美国PE公司的 Wallac 1420 多功能检测仪,

德国西门子拜耳化学发光仪ADVIA Centaur